Actriz sevillana nacida en 1975. Estefanía de los Santos finaliza sus estudios de Arte Dramático en la escuela de Cristina Rota en 1999, completando sus estudios con seminarios de dramaturgia actoral con Sanchís Sinisterra, Fermín Cabal y David Planell; voz con Omar Rossi y Andrés Navarro; e interpretación con John Strasberg, Fernando Piernas, Claudio Tolcachir, Fernando Orazi y Pablo Messiez.
En cine la podemos ver en: La mesita del comedor, de Caye Casas, por la cual ha recibido varios premios internacionales y nacionales en Festivales de género de terror; Con los años que me quedan, ¡Ay, mi madre! y Tras el reflejo, estas tres escritas y dirigidas por Frank Ariza; Las leyes de la frontera, de Daniel Monzón; Sevillanas de Brooklyn, de Vicente Villanueva; Ama de Júlia de Paz; Para toda la muerte, escrita por Ana Graciani y dirigida por Alfonso Sánchez; y Jaulas, ópera prima de Nicolás Pacheco, por la que ha obtenido el premio a mejor actriz en los premios ASECAN 2019.
También en cine ha participado en Tiempo después, de José Luis Cuerda; Que Dios nos perdone, de Rodrigo Sorogoyen; Relaxing Cup of Coffe, de José Semprún; Carmina y amén, de Paco León; Hablar, de Joaquín Oristrel; De chica en chica, de Sonia Sebastián; Miel de naranjas, de Imanol Uribe; y Grupo 7, de Alberto Rodríguez, por la que estuvo nominada a actriz revelación en los Goya 2013, en los premios del Círculo de Escritores Cinematográficos y ASECAN. Y obtuvo los premios del Festival Courmayer Noir y del Festival de Cine de Cáceres por dicho trabajo.
Su primera película fue Don Mendo Rock ¿La venganza?, dirigida por José Luis Garcia Sánchez.
En televisión ha participado en series como Los sin nombre, de Pau Freixas aún por estrenar; 4 Estrellas para TVE en su segunda y tercera temporadas; Mentiras pasajeras serie para Paramont+ y producida por El Deseo. Mariachis, para HBO México y Herederos por accidente, de Clarovideo, también para México.
Otras de las series en las que ha participado son Arde Madrid, de Paco León y Anna Costa y La peste en la primera y segunda temporada, dirigidas por Alberto Rodríguez, ambas series para Movistar Plus+; Perdóname, Señor y Secretos de Estado, de Frank Ariza para Telecinco. Para TVE El Continental, de Frank Ariza y Urtain en Estudio1 dirigida por Andrés Luque; Cheers, Marco y Bienvenidos al Lolita, estas tres últimas para Antena 3.
En teatro ha trabajado en: Lectura fácil, dirigida por Alberto San Juan; La Valentía, escrita y dirigida por Alfredo Sanzol; Siempre me resistí a que terminara el verano, de Lautaro Perotti, por la que estuvo nominada como mejor actriz de reparto en 2016 por la Unión de Actores; Marca España, espectáculo escrito y dirigido por Alberto San Juan y Fuga de cuerpos, escrita por María Velasco y dirigida por Javier Giner; Las plantas, Las palabras, Los ojos, Ahora y La distancia, todas ellas escritas y dirigidas junto a la versión de Bodas de Sangre por Pablo Messiez. Por La distancia recibió el premio de la Unión de Actores en 2018.
También en teatro participó en Urtain, escrita por Juan Cavestany y dirigida por Andrés Lima para Animalario; La gimnasta, escrita por Alberto de Casso y dirigida por Marina Caressi; Otra noche sin Godot, dirigida por Fermín Cabal; Los viernes del hotel Luna Caribe escrita por Alberto de Casso y dirigida por Fermín Cabal, que también la dirigió en En el túnel un pájaro, con texto de Paloma Pedrero, son alguna de las obras teatrales en las que también ha trabajado.